Podstawowe zasady oceny badań laboratoryjnych stosowanych w diagnostyce zakażeń Mycoplasma spp. u bydła. Najczęstsze błędy przedlaboratoryjne i interpretacyjne

Z innych metod identyfikacji zarazka, wykorzystywanych w diagnostyce zakażeń Mycoplasma spp. u bydła, należy wymienić metodę immunohistochemiczną. Metoda ta znalazła zastosowanie do potwierdzenia obecności antygenu M. bovis w różnych narządach i tkankach pochodzących od poronionego płodu bydlęcego, takich jak: móżdżek, płuca oraz wątroba. W metodzie tej wykorzystano mysie przeciwciało monoklonalne MAB970 specyficzne dla M. bovis (7). Warto jednak zwrócić uwagę na to, że metoda immunohistochemiczna stosowana jest raczej jako technika dodatkowa, uzupełniająca inne metody badawcze, takie jak hodowlane lub molekularne (PCR). W odróżnieniu od tych ostatnich umożliwia ona jednak ustalenie dokładnej lokalizacji zarazka w danym narządzie lub tkance, na przykład nierzadko spotykanego na powierzchni pęcherzyków płucnych (7). Podobnie jak w przypadku bezpośredniego testu ELISA, wynik ujemny uzyskany metodą immunohistochemiczną nie wyklucza obecności zarazka w badanym materiale. Dlatego też do kompleksowej diagnostyki mykoplazm bydlęcych opracowano różnorodne techniki biologii molekularnej, które umożliwiają identyfikację materiału genetycznego zarazka.

Z metod tych należy wymienić: reakcję łańcuchową polimerazy (ang. polymerase chain reaction, PCR) oraz różne jej odmiany, w tym reakcję łańcuchową polimerazy w połączeniu z elektroforezą w gradiencie czynnika denaturującego (ang. polymerase chain reaction/denaturing gradient gel electrophoresis, PCR/DGGE) oraz hybrydyzację in situ. Dotychczas opracowano metodę PCR dla wielu gatunków mykoplazm izolowanych od bydła, m.in.: M. bovis, Mycoplasma mycoides subsp. mycoides (Mmm) (czynnik etiologiczny zarazy płucnej bydła), M. bovigenitalium czy M. canis (13). W porównaniu do klasycznej techniki PCR jej modyfikacja w postaci real-time PCR (PCR w czasie rzeczywistym; quantitative PCR, qPCR, PCR ilościowy), poza możliwością powielania odcinków DNA, umożliwia ocenę ilościową produktu PCR powstającego w czasie kolejnych cykli reak...

Ten materiał dostępny jest tylko dla użytkowników
którzy są subskrybentami naszego portalu.

Wybierz pakiet subskrypcji dla siebie
i ciesz się dostępem do bazy merytorycznej wiedzy!

Wybierz subskrypcję

Masz aktywną subskrypcję?

Zaloguj się

Nie masz jeszcze konta w serwisie? Dołącz do nas