Grzybicze zapalenie stawów u kameleona jemeńskiego
Gdy kolonie uzyskały rozmiar umożliwiający wykonanie preparatu odciskowego, oglądano je pod powiększeniem 200x oraz 400x z użyciem błękitu laktofenolowego. W preparacie można było zaobserwować septowane, lekko pofalowane strzępki oraz średnioliczne, kuliste konidia osadzone grupami na końcu monofialidów (ryc. 6). Szczepy opisywane do tej pory w literaturze w większości wytwarzały także komórki drożdżopodobne, jednak w przypadku omawianego izolatu nie zaobserwowano tego zjawiska. Istnieją doniesienia o podobnych izolatach, występujących jedynie w formie grzyba strzępkowego (16).
Ze względu na charakterystyczny wygląd kolonii oraz morfologię zarodników podejrzewano grzyba z rodzaju Metarhizium. W celu potwierdzenia identyfikacji wykonano analizę przy użyciu spektrometru mas typu MALDI-TOF MS, jednak baza danych nie zawierała tego gatunku, jedynie blisko spokrewniony gatunek należący do rodzaju Metarhizium (Metarhizium marquandii). W niniejszym badaniu podjęto dwie próby identyfikacji wyhodowanego grzyba. Pierwsza polegała na bezpośrednim nałożeniu szczepu na płytkę wraz kwasem mrówkowym, a następnie szczep pokryto 1-mikrolitrowym roztworem matrycy (Bruker). Druga identyfikacja została wykonano z zastosowaniem protokołu ekstrakcji zgodnie z procedurami udostępnionymi przez producenta oraz opisanymi w publikacji Honsiga i wsp. (13).
Po porównaniu z bazą uzyskano wyniki 1,49, uniemożliwiające jednoznaczne potwierdzenie izolatu do gatunku, jednakże otrzymane dane potwierdzały nasze przypuszczenia dotyczące przynależności rodzajowej izolatu.
Diagnostyka molekularna
Aby uzyskać precyzyjną identyfikację, pracownicy Katedry Biotechnologii i Mikrobiologii Politechniki Gdańskiej przeprowadzili analizę molekularną obejmującą sekwencjonowanie DNA. DNA wyizolowano przy użyciu wcześniej opisanej metody (18). Do amplifikacji fragmentu DNA [...]
którzy są subskrybentami naszego portalu.
i ciesz się dostępem do bazy merytorycznej wiedzy!
POSTĘPOWANIA
w weterynarii
