Klonowanie koni metodą transferu jądra komórki somatycznej
Połączenie karioplastu z cytoplastem
W kolejnym kroku następuje połączenie pozyskanego jądra komórki somatycznej (karioplast) z oocytem po enukleacji (cytoplastem) poprzez elektrofuzję lub przez bezpośrednią iniekcję jądra komórkowego do ooplazmy. Elektrofuzja ma na celu wprowadzenie nienaruszonej komórki somatycznej do przestrzeni (ang. perivitelline space), leżącej pod osłonką przejrzystą (łac. zona pellucida) oocytu. Tak powstały twór następnie jest ustawiany pomiędzy dwiema elektrodami (2,2 kV/cm przez 40 sek.), co powoduje powstawanie porów w odpowiednich miejscach błony obu komórek i indukuje połączenie się karioplastu z cytoplastem. Drugi impuls elektryczny jest przydatny w celu aktywowania „oocytu”, co jest porównywalne do aktywacji oocytu po zapłodnieniu, ergo poprzez indukcję oscylacji jonów wapniowych w komórce jajowej. Gdy zrekombinowany oocyt zostanie aktywowany (ryc. 1), możliwe jest chirurgiczne przeniesienie go do jajowodu klaczy biorczyni lub hodowla in vitro do stadium blastocysty i wykonanie klasycznego embriotransferu przez szyjkę macicy. Przy transferze zarodków do biorczyń należy mieć na uwadze, że przez całą procedurę SCNT blastocysty są bardziej podatne na uszkodzenie niż podczas transferu zarodków pozyskiwanych in vivo lub in vitro (6).
Niski odsetek skuteczności SCNT
1. Utrata ciąży po embriotransferze
Niska skuteczność SCNT jest między innymi powiązana z możliwą utratą ciąży niemalże przez cały okres jej trwania, chociaż najwięcej utrat ma miejsce w pierwszych dwóch trymestrach. Nadal nie jest do końca wyjaśniona przyczyna, ale z badań nad bydlęcymi klonami wynika, [...]
którzy są subskrybentami naszego portalu.
i ciesz się dostępem do bazy merytorycznej wiedzy!
POSTĘPOWANIA
w weterynarii
