Nowoczesne metody diagnostyki patogenów mastitis
RT-PCR (Real-Time PCR)
Technika Real-Time PCR (qPCR) wydaje się być najbardziej obiecująca. Jest to nowoczesna metoda pozwalająca potwierdzić obecność patogenu w badanej próbce mleka nawet w sytuacjach, gdy stopień rozcieńczenia jest bardzo duży. Należy pamiętać, że czułość klasycznej bakteriologii jest zbyt mała, aby mogła ona posłużyć do badania mleka zbiornikowego. Technika molekularna umożliwia namnażanie DNA bakteryjnego oraz monitorowanie ilości produktów powstających podczas kolejnych cykli (ryc. 2).
Ryc. 2. Przykładowe wyniki badania metodą qPCR; ryc. archiwum autora
Aż w 43% przypadków braku wzrostu dla klasycznej metody mikrobiologicznej w qPCR uzyskuje się dodatnie wyniki (3, 4). Dotyczy to szczególnie przypadków zakażeń S. aureus, E. coli, Klebsiella spp. Koszt pojedynczego badania blisko 10-krotnie przewyższa cenę klasycznego badania mleka ćwiartkowego. Stąd też metoda używana jest obecnie do badania mleka zbiornikowego. Jednak w takich krajach jak Holandia testy qPCR są już wykorzystywane do badania pojedynczych zwierząt. Cena podyktowana jest popularnością danego rozwiązania.
Metoda ta znacznie ułatwia działania lekarskie w stadach zakażonych drobnoustrojami zakaźnymi. Dotyczy to przede wszystkich Str. agalactiae, S. aureus, Prototheca spp. Używając tej metody, można otrzymać wyniki dla mleka zbiornikowego nawet dla niskiej prewalencji wymienionych patogenów na poziomie zaledwie kilku procent (2).
Alternatywą dla wspomnianego badania qPCR pozostają badania przesiewowe/kierunkowe, które generują znacznie większą ilość pracy i są zdecydowanie droższe niż qPCR. Realizując badanie mleka zbiornikowego metodą qPCR, można znaleźć odpowiedź na pytanie, czy badane patogeny stanowią istotny problem w stadzie, czy może jest ich niewiele. Dokładniejszą informację daje wartość Ct, która informuje o poziomie badanego patogenu. Im wyższa wartość Ct, tym mniej materiału genetycznego w badanej próbce. Wspomniana wartość wskazuje, ile potrzebnych b...
którzy są subskrybentami naszego portalu.
i ciesz się dostępem do bazy merytorycznej wiedzy!
